| Abstract: | For omega-3-kapsler med kalsiumkarbonat ble det observert problemer med dannelse av brune flekker som misfarget det hvite kapselskallet en viss tid etter produksjon. Produktet er myke suspendert i fyllmaterialet. Av visuelle årsaker er denne suspensjonen maskert ved å tilsette titaniumdioksid som fargestoff i gelatinkapselskallet. En hypotese er at misfargingen skyldes lekkasje av fiskeolje fra fyllmaterialet gjennom kapselskallet. Olje som lekker ut og kommer i kontakt med luft, vil oksideres og få en mørk farge. I første del av studien ble eldre kapsler med forskjellige type mykgjørere i gelatinfilmen (glycerol, sorbitol og en blanding av glycerol/sorbitol 40/60) studert over en periode på 4-5 måneder. Kapslene ble karakterisert med hensyn til mekaniske egenskaper (film- og sømstyrke), vanninnhold, utseende og partikkelstørrelse (evt. vekst i partikkelstørrelse eller aggregering) av suspenderte partikler. Siste del av studien tar for seg nyproduserte kapsler av samme produkt hvor det er gjennomført endel endringer med tanke på å forbedring av produktet. Kort oppsummert ble suspensjonen av titaniumdiosid i gelatinmassen optimalisert ved hjelp av et fuktetrinn og et malningstrinn, en råvare ble byttet ut med en renere kvalitet, størrelse på kapslene ble redusert og forholdet mellom glycerol og sorbitol ble justert. Etter 13 uker er det fortsatt ikke observert brune flekker på kapslene som ble produsert etter prosessoptimalisering. Kombinasjonen av de i verksatte tiltakene ser ut til fungere tilfredsstillende. |
| URI: | http://hdl.handle.net/10037/4454 |
| Abstract: | Antibakteriell aktivitet mot Gram positive og Gram negative bakterier er påvist i ekstrakter av celler og plasma fra Solaster endeca, Crossaster papposus og Urasterias Linckii. Det har også blitt påvist antibakteriell aktivitet mot Gram negative bakterier i ekstrakter av hel kropp fra Solaster endeca og Croassaster papposus. Materialet ble grovekstrahert med 60 % Acetonitril, videre ble vannfase og organisk fase ble separert. Ved hjelp av fastfase ekstraksjon ble vannfasen fraksjonert med 0,05 % trifluoreddiksyre i Acetontril med trinnvis økende volumprosent. Bioaktive-eluater fra fastfase ekstraksjonen ble videre separert på omvendt fase HPLC-kolonne med samme mobilfase bestående av Acetonitril/vann med 0,05 % trifluoreddiksyre og. Analyse av aktive HPLC-fraksjoner ble utført ved ESI-MS i positiv modus, og MS/MS-analyse ble utført på Q-TOF. ESI-MS analyse av en HPLC-fraksjon fra S. endeca celler indikerte at man har et antibakteriell peptid på rundt 12315 Da. Etter trypsinering og påfølgende LC-MS/MS analyse ble sekvens av 2 peptidfragmenter bestemt. UV-spekter (fra HPLC separasjonen) og MS-spekter av fraksjonene fra hel kropp S. endeca og C. papposus indikerer tilstedeværelse av Riboflavin lignende substanser med antibakteriell aktivitet. Fra aktive HPLC-fraksjoner fra helkropp C. papposus fikk man 3 forbindelser med masse på 2338, 2485 og 3094 Da. |
| URI: | http://hdl.handle.net/10037/4406 |
| Abstract: | Marin bioprospektering er i hurtig fremmarsj både i Norge og på verdensbasis. Det kan defineres som en formålrettet og systematisk leting etter bestander, bioaktive forbindelser eller gener i marine organismer med sikte på utvikling av et produkt som er kommersielt eller samfunnsmessige viktige. Målet med denne oppgaven er å lete etter forbindelser med anticancereffekt i ekstrakter av tre ulike marine organismer. Det ble laget både vandige og organiske ekstrakter fra tre ulike marine organismer, Parastichopus tremulus, Metridium senile og Halocynthia pyriformis. Det ble brukt rent vann for vandige ekstraksjoner og diklormetan:metanol (1:1) for organiske ekstraksjoner. Ekstraktene ble fraksjonert på preparativ HPLC og testet for aktivitet mot humane melanoma kreftceller (A2058). Fraksjoner som ga celleoverlevelse på mindre enn 40 % ble definert som aktive, mellom 40-50 % usikre og over 50 % inaktive. Totalt ble det detektert ti fraksjoner med sikker aktivitet og tre med usikker aktivitet fra de tre marine organismene ved screening etter primær fraksjonering. Det meste av bioaktiviteten ble funnet i de organiske fraksjonene. Aktive og usikre fraksjoner fra P. tremulus og H. pyriformis ble ikke prioritert for videre opprensning og strukturanalyser. Derimot ble de mest aktive fraksjonene fra M. senile valgt til videre opprensning og strukturanalyser ved hjelp av ulike massespektrometre som for eksempel LCMS-ESI-TOF, LCMS-ESI-Q, LCMS-ESI-QqQ og LTQ-Orbitrap. Generelt fikk vi svake og relativt få signaler på MS’ene når vi analyserte de aktive fraksjonene, noe som tyder på at prøvene ikke var konsentrerte nok. Vi fant imidlertid ett ion som kunne forklare anticancer effekten i en av de aktive fraksjonene. Det hadde en m/z på 300,2912 på LCMS-ESI-TOF og 300,2896 på LTQ Orbitrap og molekylformelen ble beregnet til å være C18H37NO2. Et søk i databaser over kjente bioaktive forbindelser fra marine organismer med denne molekylformelen ga 6 treff. En av disse, Jaspine B, er beskrevet som en cytotoksisk forbindelse, og tandem MS analyser tyder på at det er denne forbindelsen vi har funnet i vårt ekstrakt. |
| URI: | http://hdl.handle.net/10037/4403 |
| Abstract: | Det har vært stadig mer forskning på rollen av glykosylering i utvikling av sykdommer i de siste tiårene. Glykosylering av proteiner er en prosess hvor karbohydrat grupper overføres til et protein ved hjelp av glykosyltransferaser. Denne prosessen er nødvendig for riktig folding av proteiner som gir riktig funksjon til ulike proteiner. Endringer i glykosylering av proteiner har vist å ha sammenheng med utvikling av en rekke sykdommer og kreft. Disse endringer i glykosylering kan oppstå som følge av endringer i uttrykksnivåer av glycosyltransferasene. Denne masteroppgaven har til hensikt å verifisere om en gruppe glykosyltransferaser (Fut8, Mgat3, Ugt1a7c, St3gal6, St6gal1, Gcnt1 og Gcnt2) er mulige målgener for transkripsjonsfaktoren Pax6. Metodene RT-PCR og qPCR ble brukt for å se på uttrykket og eventuelle nedreguleringer av de sju testede glykosyltransferaser i FlpIn-3T3-Pax6 og FlpIn-3T3-Pax6(5a) på RNA-nivå. Det ble også brukt metoder som isolering av glykoproteiner ved hjelp av concavalin A (Con A) og Wheat Germ Agglutinin (WGA), immunopresipitering (IP), Western blot (WB) og immunohistokjemi (IHC) for å prøve og detektere endringer i glykosylering på protein-nivå. Resultat av denne masteroppgaven viste at de sju testede glykosyltransferasene blir nedregulert i nærvær av Pax6 og isoformen Pax6(5a) på RNA-nivå. Når det gjelder metodene glykoprotein isolering vha ConA og WGA og IP ble det ingen klare resultater, mens Western blot resultatet viste at nucleolin blir nedregulert både i Pax6 og Pax6(5a) på protein nivå. Konklusjonen for denne masteroppgaven er at vi har identifisert glykosyltransferasene Fut8, Mgat3, Ugt1a7c, St3gal6, St6gal1, Gcnt1 og Gcnt2 som nye målgener for Pax6. Disse glykosyltransferasene blir nedregulert i nærvær av Pax6 og Pax6(5a) og basert på tidligere funn har det vist at nedregulering av disse glykosyltransferasene fører til en rekke sykdommer. Resultatet vi ser i denne masteroppgaven har gitt en ytterligere innsikt i mulige rollen av Pax6 i regulering av de sju testede glykosyltransferasene i utvikling av sykdommer og kreft. |
| URI: | http://hdl.handle.net/10037/4399 |
| Abstract: | Invasjon og metastasering er den vanligste årsaken til død hos kreftpasienter og dermed et alvorlig klinisk problem. Det er derfor viktig å forske på dette området for å finne mekanismene bak disse prosessene. Matriks metalloproteinaser (MMPer) er overuttrykt i flere kreftformer. PAX6 er en transkripsjonsfaktor som er vist å regulere matriks metalloproteinase 2 og 9 (MMP-2 og MMP-9) i henholdsvis glioblastomaceller og ved sårheling i hornhinnen hos mus. PAX6 uttrykket og påvirkningen av eventuelt MMPer og andre gener som er assosiert med metastase i andre kreftcellelinjer ble studert i denne oppgaven. PAX6 uttrykket ble identifisert i de tre prostatakreft cellelinjene ved hjelp av RT-PCR. Uttrykket av eventuelt andre gen som er assosiert med PAX6 eller metastasering ble kartlagt ved hjelp av RT-PCR, og genene som viste samme uttrykksmønster som PAX6 ble undersøkt videre. Transfeksjon med siRNA eller plasmidvektor ble utført for henholdsvis å slå ut eller innføre uttrykk av PAX6. Forandring av genuttrykk ble undersøkt ved hjelp av Q-PCR og Western blott. Invasjonsevnen til PC3 cellene ble undersøk med celleinvasjonsassay. Resultatene viser at PAX6 uttrykkes i PC3 og DU145 cellelinjene, mens LNCaP cellene mangler PAX6 uttrykk. Vi ser også at en nedregulering av PAX6 i PC3 cellene fører til redusert uttrykk av MMP-9, MMP-14, TIMP-3, S100A4 og uPA. Invasjonsassayet viser en mulig sammenheng mellom økt PAX6 uttrykk og migrasjon av celler. |
| URI: | http://hdl.handle.net/10037/4398 |
Munin is powered by DSpace 1.8.2
The University Library of Tromsø, N-9037 Tromsø
Tel: +47 77 64 40 00, E-mail: munin@ub.uit.no