LC-MS basert analysemetode av gentamicin i blodprøver

Abstract

Gentamicin er hyppig brukt til å behandle alvorlige infeksjoner, men kan ved langvarig behandling eller ved høy serumkonsentrasjon gi vevsskade i både nyrer og ører. Måling av serumkonsentrasjonen skjer rutinemessig med en immunologisk metode som krever et blodvolum på 500 µl. Hyppige målinger er i noen tilfeller nødvendig for å få god kontroll på behandlingen. Premature barn har lav kroppsvekt og lite blodvolum, og et prøvevolum på 500 µl er for stort til at man kan ta hyppige prøver for å følge serumkonsentrasjon. Målet med studien var å utvikle en LC-MS basert analysemetode som vil kreve et mindre prøvevolum enn den immunologiske metoden. Prøvene ble opparbeidet med felling av proteiner med 10 % TCA. Deretter ble supernatanten overført til OSTRO-kolonne for å fjerne lipider før analyse med LC-MS. Kromatografien ble utført med en BEH AMIDE-kolonne En standardrekke med serumprøver i konsentrasjoner på 1, 4, 15, 30 og 50 µg/ml ble opparbeidet og analysert for validering av metoden. Det er utviklet en LC-MS metode for analyse av gentamicin basert på et prøvevolum på 25 µl serum. De fem ulike molekylene i gentamicin lot seg ikke fullstendig separere, men kunne kvantifiseres individuelt i det aktuelle konsentrasjonsområdet. Etter om lag 300 injeksjoner av prøve på var retensjonstid og form av gentamicin-toppene uendret. Metoden må videreutvikles for å innfri krav til linearitet, relativt standardavvik og nøyaktighet.