Kvantitering av Regulatoriske T-celler vha. den intracellulære markøren FoxP3 og RT-PCR

Abstract

To prosent av gravide kvinner i Norge har blodplatetypen HPA 1bb og 10 % av disse danner antistoffer mot fosterets HPA 1a postive blodplater i HPA 1a inkompatible svangerskap. Mekanismen for dette er trolig immunisering mot blodplater overført fra foster til mor (føto-maternell blødning) eller HPA 1a antigenet introdusert via vitronectin reseptoren på invaderende trofoblaster tidlig i svangerskapet. Det vanlige er at mor tolererer føtale antigener, og alloantistoffproduksjon representerer brudd på toleranse for føtale antigener. Det er mye kunnskap om lokale immunologiske faktorer som kan forklare toleranse for føtale antigener. Tilstedeværelsen av regulatoriske CD4+ CD25+ FoxP3+ T-celler (Tregs) er en viktig faktor for å forklare det ”immunologiske paradokset” knyttet til at mor tolererer fosteret i hele svangerskapet til tross for mors immunsystem er optimalisert for å forkaste alloantigener. Regulatoriske T-celler er også sentrale i infeksjonsforsvaret, ved kreftutvikling og i forbindelse med autoimmune sykdommer, da deres oppgave er å regulere immunresponsen. FoxP3 er en relativt spesifikk markør for Tregs. Vårt mål var å lage en prosedyre for kvantitering av FoxP3 uttrykket i Tregs fra fullblod vha. RT-PCR. FoxP3 ble amplifisert fra mRNA isolert fra blodceller hos friske blodgivere for å lage en standardkurve. Uttrykket FoxP3 ble sammenlignet med housekeeping gener som uttrykkes konstant i T-celler for å finne endringer i FoxP3 uttrykket i ulike kliniske situasjoner. Metoden som ble laget ,ble testet på ni friske blodgivere. Dette viste at FoxP3 uttrykket ikke var konstant hos blodgivere. For få prøver ble analysert til å fortelle noe om normalområdet hos friske mennesker. Metodens nytteverdi er vanskelig å vurdere på dette tidspunkt, men ved analyser av enda flere friske blodgivere, samt sammenligning med prøver fra gravide og pasienter med ulike sykdomsbilder, vil FoxP3 uttrykket i Tregs kunne være av klinisk betydning. Forandringer i metoden med bruk av cellesortering og parallelle kjøringer med flowcytometri er også planlagt gjort for å få et enda klarere innblikk i hvordan FoxP3 uttrykkes i ulike situasjoner (graviditet/sykdom). Forhåpentligvis kan metoden benyttes som et supplement til dagens diagnostikk når den er fullstendig klarlagt og evaluert.