Merking av nevroncelledød med Fluoro jade C etter hypotermi og oppvarming i Long Evans rotter. En metodereproduksjon

Abstract

Å kunne lokalisere indusert skade i hjernen er et svært viktig verktøy i nevrobiologi. I 1997 utviklet Schmued sitt Fluoro-jade fargestoff som spesifikt merket døende og skadde nevroner i histologiske snitt. I 2005 produserte han den tredje generasjonen av fargestoffet, nemlig Fluoro-jade C (FJC). Å innføre nye laboratorieprosedyrer krever at man har gode protokoller og verifiserer at metoden faktisk virker. Denne oppgaven gikk ut på å etablere en protokoll for å farge hjernesnitt med FJC.

Hjernene som ble brukt kom fra seks rotter som var benyttet til hukommelsestesting. Av disse ble ett dyr nedkjølt til 24 grader under anestesi. Fire dyr ble lagt i narkose, men ikke nedkjølt, og ett dyr ble verken nedkjølt eller lagt i narkose. Etter at dyrene var avlivet, ble hjernene snittet i 40 μm tykke snitt og farget med FJC. Under utprøving av protokollen varierte vi tiden snittene var lå i fargebad. Snittene ble fotografert med et fluorosens mikroskop og bildene analysert med bildeprogramvare.

Vi så indirekte tegn til at snittene ble farget med FJC, men vi kunne ikke påvise noen skadde/døde nevroner i noen av hjernene. Antakelig skyldes dette at behandlingen som dyrene ble utsatt for; hypotermi og/eller anestesi, ikke kunne indusere noen skade. Vi planla å lage positive kontroller med kjemisk hjerneskade for å verifisere protokollen, men det lot seg ikke gjennomføre før dyrestallen ble stengt (april 2017, per høsten 2019 ennå ikke åpnet).