Isolering og vurdering av invariable NKT-cellers dreperfunksjon

Abstract

Invariable Natural Killer T (iNKT) celler er en undergruppe av T-lymfocytter som interagerer med det non-polymorfe CD1d-molekylet og aktiveres av glykosphingolipid-antigener (som αGalCer ). iNKT celler kan produsere rikelige mengder immunoregulerende cytokiner som påvirker nivået av aktivering til mange typer celler og kan også drepe andre celler. Målet for denne oppgaven var å undersøke om iNKT-celler hadde innvirkning på dannelsen av Epstein-Barr transformerte cellelinjer i laboratoriet. Isolering av B-celler med anti-CD22 gir tilsynelatende mer effektiv etablering av Epstein-Barr Virus transformerte B-lymfoblaster (EBV-BL) sammenlignet med isolering av B-celler med anti-CD19. Både CD19 og CD22 uttrykkes nærmest utelukkende på B-celler. Det er derimot vist at iNKT celler uttrykker lave, men signifikante nivåer av CD19 på celleoverflaten. Vi undersøkte om iNKT-celler ko- isoleres med anti-CD19 og om de dreper EBV-transformerte B-celler. PBMC ble sortert til hhv CD19+ og CD22+ celler ved MACS, og deretter transformert med Epstein-Barr virus. Cellekulturene ble vurdert for celleproliferasjon og innhold av 6B11+ iNKT celler ved flowcytometri. Vi isolerte senere PBMC og sorterte til CD56+ celler ved MACS. Av disse ble 6B11+ celler isolert ved FACS. Den sorterte cellesuspensjon ble merket med anti-CD107 antistoff og deretter reagerte med målceller (EBV-BL). Til slutt utførte vi flowcytometri for å vurdere celledreping i form av celledegranulering. Vi identifiserte 6B11+ celler i PBMC fra alle donorer. B-cellesortering med MACS er mer effektivt (renere populasjon) med anti-CD22 antistoff sammenlignet med anti-CD19 antistoff. iNKT-celler degranulerte ikke ved inkubering med EBV- BL. Derimot fant vi at CD3+-celler, forskjellige fra iNKT celler, degranulerte i respons til EBV-BL og at disse koisoleres ved MACSorting med anti-CD56 antistoff selv om disse er CD56 negative. Vi kunne ikke påvise at iNKT-celler dreper EBV-BL. Dette skyldes trolig at donorene har tidligere gjennomgått EBV-infeksjon, og dermed har T-cellemediert immunitet mot viruset. Det er uvisst hvorfor disse cellene følger passivt med ved MACS.