Isolering av etylester og triacylglyserol ved hjelp av fast fase ekstraksjon

Abstract

I de siste par tiårene har det vært en kraftig økning i humant bruk av kosttilskudd som inneholder langkjedede omega-3 fettsyrer, det vil si eicosapentaensyre (EPA) og docosaheksaensyre (DHA). Årsaken er de antatte positive helseeffekter disse fettsyrene har. I dag er det vanligst at slike kosttilskudd tas i form av kapsler, blant annet fordi mange mennesker synes marine oljer er ubehagelig å drikke direkte. En utfordring med kapsler med marine oljer er at man må ta ganske mange for å oppnå anbefalt dose av EPA og DHA. Produsenter har derfor fremstilt kapsler som har et konsentrert innhold av disse fettsyrene, hovedsakelig i form av enten etylestere (EE) eller triacylglyserol (TAG; triglyserid). Denne oppgaven har vært gjennomført i samarbeid med bedriften Nordic Pharma Inc AS i Kaldfjord, Tromsø. Bedriften produserer et TAG-produkt med konsentrert innhold av EPA og DHA. Først lages et EE-produkt som så gjennomgår en molekylær destillasjon for å isolere etylestere med høyt innhold av EPA og DHA. Disse transesterifiseres enzymatisk til glyserol for å danne TAG med et høyt nivå ev EPA og DHA. Hovedmålet med denne oppgaven var å etablere en fast fase ekstraksjon (SPE) for å separere EE og TAG fra en industriell transesterifiseringsprosess og deretter karakterisere disse to isolerte klassene. Resultatene viste at det er mulig å separere etylestere og triacylglyserol ved å bruke en spesifikk fast fase ekstraksjon. Det var interessant å oppdage at EE kunne separeres i to fraksjoner der den ene hadde et svært høyt innhold av langkjedede omega-3 fettsyrer mens den andre var fri for disse. Isolering av lipidklassene ved ulike tidspunkt fra den industrielle transesterifiseringen ved hjelp av SPE med påfølgende TLC-analyse og med HPLC, viste at nivåene av TAG, DAG og EE forandret seg som forventet. Etter 55 timers transesterifisering var det fremdeles noe EE igjen. EE eluert fra SPE-kolonna inneholdt svært små nivåer av andre lipidklasser. Eluerte TAG-prøver fra de ulike tidspunktene inneholdt ganske mye DAG, MAG og FFA. Disse kunne i stor grad fjernes fra TAG-prøvene ved å bruke samme type fast fase kolonne, men da med litt andre kondisjonerings- og elueringsbetingelser. Arbeidet med utviklingen av metodene tok såpass mye tid av mastergraden at det dessverre bare ble lite tid igjen å bruke på industrielle prøver.