Den nye helikase- og primasehemmeren amenamevir: Antiviral effekt mot BK polyomavirus (BKPyV)?

Abstract

Bakgrunn. BK polyomavirus (BKPyV) finnes asymptomatisk i nyreepitelet hos de fleste voksne, men kan gi polyomavirus-assosiert nefropati og hemorragisk cystitt ved henholdsvis nyretransplantasjon og beinmargs-/stamcelletransplantasjon. Det er ikke funnet noen effektiv antiviral behandling mot viruset. Amenamevir er en ny hemmer av helikase-primasekomplekset hos alfaherpesvirus, som i denne oppgaven undersøkes for in vitro antiviral effekt mot BKPyV og effekt på viabilitet av nyreepitelceller.

Materiale og metode. Før forsøk med BKPyV, ble aktivitet av amenamevir testet ved behandling av A549-celler infisert med herpes simplexvirus 1 (HSV-1). Humane primære nyreepitelceller fra proksimale tubuli (RPTECs) ble sådd ut og etter 24 timer infisert med BKPyV og/eller behandlet med amenamevir. Metodene som ble brukt for å evaluere effekten på cellene var xCELLigence, ATP-måling og fasekontrastmikroskopi, mens kvantitativ real-time PCR og immunfluorescensmikroskopi ble brukt for å finne virkningen på henholdsvis mengden virus-DNA ekstracellulært og uttrykket av virusproteiner i vertscellene tre dager etter infeksjon.

Resultater. Medikamentet viste seg å gi antiviral effekt på HSV-1-replikasjon. Hos RPTECs behandlet med opptil 40 µM amenamevir fant vi ingen effekt på viabilitet. Mengden ekstracellulært virus-DNA og uttrykk av virale proteiner tre dager etter infeksjon var heller ikke påvirket ved konsentrasjoner opptil 10 µM, som er over 100 ganger høyere enn 50 % effektiv konsentrasjon rapportert for HSV-1. I de siste forsøkene så vi at amenamevir felte ut krystaller i medium, slik at konsentrasjonen nok var noe lavere enn tilsiktet.

Konklusjon. Amenamevir påvirker sannsynligvis hverken celleviabilitet av RPTECs eller replikasjon av BKPyV i de samme cellene. Videre studier er nødvendig for å finne en effektiv og selektiv antiviral behandling mot BKPyV.