Identifisering av PAX- og MMP-uttrykk i tre prostatakreft-cellelinjer

Abstract

Invasjon og metastasering er den vanligste årsaken til død hos kreftpasienter og dermed et alvorlig klinisk problem. Det er derfor viktig å forske på dette området for å finne mekanismene bak disse prosessene. Matriks metalloproteinaser (MMPer) er overuttrykt i flere kreftformer. PAX6 er en transkripsjonsfaktor som er vist å regulere matriks metalloproteinase 2 og 9 (MMP-2 og MMP-9) i henholdsvis glioblastomaceller og ved sårheling i hornhinnen hos mus. PAX6 uttrykket og påvirkningen av eventuelt MMPer og andre gener som er assosiert med metastase i andre kreftcellelinjer ble studert i denne oppgaven. PAX6 uttrykket ble identifisert i de tre prostatakreft cellelinjene ved hjelp av RT-PCR. Uttrykket av eventuelt andre gen som er assosiert med PAX6 eller metastasering ble kartlagt ved hjelp av RT-PCR, og genene som viste samme uttrykksmønster som PAX6 ble undersøkt videre. Transfeksjon med siRNA eller plasmidvektor ble utført for henholdsvis å slå ut eller innføre uttrykk av PAX6. Forandring av genuttrykk ble undersøkt ved hjelp av Q-PCR og Western blott. Invasjonsevnen til PC3 cellene ble undersøk med celleinvasjonsassay. Resultatene viser at PAX6 uttrykkes i PC3 og DU145 cellelinjene, mens LNCaP cellene mangler PAX6 uttrykk. Vi ser også at en nedregulering av PAX6 i PC3 cellene fører til redusert uttrykk av MMP-9, MMP-14, TIMP-3, S100A4 og uPA. Invasjonsassayet viser en mulig sammenheng mellom økt PAX6 uttrykk og migrasjon av celler.