Identifisering av en gruppe glykosyltransferaser som mulige målgener for transkripsjonsfaktoren Pax6

Abstract

Det har vært stadig mer forskning på rollen av glykosylering i utvikling av sykdommer i de siste tiårene. Glykosylering av proteiner er en prosess hvor karbohydrat grupper overføres til et protein ved hjelp av glykosyltransferaser. Denne prosessen er nødvendig for riktig folding av proteiner som gir riktig funksjon til ulike proteiner. Endringer i glykosylering av proteiner har vist å ha sammenheng med utvikling av en rekke sykdommer og kreft. Disse endringer i glykosylering kan oppstå som følge av endringer i uttrykksnivåer av glycosyltransferasene. Denne masteroppgaven har til hensikt å verifisere om en gruppe glykosyltransferaser (Fut8, Mgat3, Ugt1a7c, St3gal6, St6gal1, Gcnt1 og Gcnt2) er mulige målgener for transkripsjonsfaktoren Pax6. Metodene RT-PCR og qPCR ble brukt for å se på uttrykket og eventuelle nedreguleringer av de sju testede glykosyltransferaser i FlpIn-3T3-Pax6 og FlpIn-3T3-Pax6(5a) på RNA-nivå. Det ble også brukt metoder som isolering av glykoproteiner ved hjelp av concavalin A (Con A) og Wheat Germ Agglutinin (WGA), immunopresipitering (IP), Western blot (WB) og immunohistokjemi (IHC) for å prøve og detektere endringer i glykosylering på protein-nivå. Resultat av denne masteroppgaven viste at de sju testede glykosyltransferasene blir nedregulert i nærvær av Pax6 og isoformen Pax6(5a) på RNA-nivå. Når det gjelder metodene glykoprotein isolering vha ConA og WGA og IP ble det ingen klare resultater, mens Western blot resultatet viste at nucleolin blir nedregulert både i Pax6 og Pax6(5a) på protein nivå. Konklusjonen for denne masteroppgaven er at vi har identifisert glykosyltransferasene Fut8, Mgat3, Ugt1a7c, St3gal6, St6gal1, Gcnt1 og Gcnt2 som nye målgener for Pax6. Disse glykosyltransferasene blir nedregulert i nærvær av Pax6 og Pax6(5a) og basert på tidligere funn har det vist at nedregulering av disse glykosyltransferasene fører til en rekke sykdommer. Resultatet vi ser i denne masteroppgaven har gitt en ytterligere innsikt i mulige rollen av Pax6 i regulering av de sju testede glykosyltransferasene i utvikling av sykdommer og kreft.