Kvantitativ analyse av gentamicin i blodprøver med LC-MS

Abstract

På grunn av fare for alvorlige bivirkninger blir dosering av gentamicin basert på rutinemessig måling av serumkonsentrasjon. I dag måles serumkonsentrasjon med en immunoassaymetode som krevet et prøvevolum på 200-500 µL blod. For tidlig fødte barn har et lite blodvolum, og det er derfor ønskelig med en metode som krever et mindre prøvevolum.

Formålet med prosjektet var å utvikle en LC-MS metode for analyse av gentamicin i et mindre blodvolum.

Prøvene ble opparbeidet med proteinfelling med TCA og sentrifugering etterfulgt av fjerning av fosfolipider med Ostrosystemet. UPLC-kromatografi ble utført med HILIC-kolonne og deteksjon med ESI-MS i SIR-modus. Flere metoder for å hindre gentamicin i å binde til glass ble forsøkt.

Det er utviklet en LC-MS analysemetode basert på et prøvevolum på 50 µL. Det lot seg ikke gjøre å finne en pålitelig måte å hindre gentamicinbinding til glass.

Gentamicinkomponentene lot seg ikke separere kromatografisk, men gentamicin C1 og C1a kunne kvantifiseres separat fra gentamicin C2, C2a og C2b på grunn av masseforskjellen.

Metoden oppfyller valideringskrav til presisjon , men ikke linearitet og nøyaktighet. Følsomheten er ikke bra nok til å kvantifisere gentamicin i ønsket konsentrasjonsområde