DNA uptake in mammalian cell cultures

Abstract

Det har lenge vært hevdet at DNA som finnes i mat er innskrenket til, og blir hurtig degradert i fordøyelsessystemet til pattedyrene. Denne antagelsen har vist seg å være riktig for majoriteten av DNA i mat som går inn i fordøyelsessystemet, men mange studier har vist at denne degraderingen ikke skjer 100 %. DNA er et stabilt molekyl som kan overleve forholdene i fordøyelsessystemet, og herfra muligens bli tatt opp inn i celler, blodomløp og andre organer. Dette har i studier vist seg å kunne skje. Hvis fremmed DNA blir tatt opp av celler er det også en mulighet for at det kan bli integrert inn i vertenes eget kromosom.

Integrasjon av fremmed DNA i mammalske celler er sannsynlig en meget lav frekvensbegivenhet som in vivo er nesten umulig å detektere med nåværende tilgjengelig metodikk.

Dette studiet bruker en tarm enterocyte lignende cellelinje (Caco-2) til å undersøke muligheten av spontant opptak og mulig integrasjon av fremmed DNA in vitro. DNAet som ble brukt som markør er plasmidet pRc/CMV-SLT. Det inneholder Simian Virus 40 sitt stort T-antigen som har vist seg å ha onkogenisk potensiale under kontroll av den menneskelige cytomegalovirus promoter. Hvis integrert inn i de mammalske cellene, ville utvendig forandringer være synlige ved at det forandrer cellens morfologi.

PCR som amplifiserer stort T-antigen sekvensen ble brukt til å analysere DNAet som ble isolert fra celle kulturene. Cellene som ble dyrket i tilstedeværele av plasmidet pRc/CMV-SLT ga positive signaler for stort T-antigen når amplifisert med PCR. Men denne metoden kunne ikke angi om DNAet som ble detektert faktisk hadde blitt tatt opp av cellene og var integrert. Ingen visuelle forandringer av morfologien til cellen ble observert i løpet av studiet.